摘要：病原生物學是研究病原生物的形態、結構、生命活動規律以及與機體相互作用關系的一門學科，主要包括醫學微生物學和人體寄生蟲學。醫學微生物學主要研究病原微生物與人類疾病的關系問題，包括研究病原微生物的生命特征或生物學特性，致病性與致病機理、感染與免疫、特異性診斷和防治等問題； 人體寄生蟲學是研究人體寄生蟲的形態結構、生活史、致病機制、實驗診斷、流行規律與防治措施的一門科學；免疫學是研究機體免疫系統的組成、結構與功能、免疫應答的發生機制以及免疫學在疾病診斷與防治中應用的一門科學。
一. 實驗要求
1. 實驗前必須掌握與實驗相關的醫學微生物學、醫學寄生蟲學及醫學免疫學基礎理論。做好預習，明確實驗目的與實驗內容。
2. 對于設計性實驗，在老師的指導下，注意發揮自身潛能，勤于思考，靈活掌握所學知識。
3. 在實驗過程中做到三嚴：嚴肅、嚴格、嚴謹。如實記錄實驗結果，按規定完成實驗報告。對于失敗實驗結果要分析原因，必要時重復實驗。
4. 嚴格遵守實驗室規則。
二. 實驗室規則
1.進實驗室穿工作服，離開時脫下，反折。
2.除必需教材、文具外，其他物品禁止帶入實驗室。
3.按規定位置就坐。保持實驗室安靜，不得隨意走動、進出。
4.實驗室內禁止飲食、吸煙。謹防經口感染病原。
5.實驗操作應嚴格按實驗指導和教師的要求進行。
6.實驗過程中若不慎將傳染性標本污染桌面、手及其他物品時，應立即報告老師緊急處理，不得擅自處理。常見處理如下：
（1）皮膚破傷：先除盡異物，用無菌生理鹽水洗凈后，涂以2%紅汞或2%碘酒，必要時進行包扎。
（2）灼傷：涂以凡士林油，5%鞣酸或2%苦味酸。
（3）化學藥品腐蝕傷：若為強酸，先用大量清水沖洗，再以5%碳酸氫鈉或氫氧化銨溶液洗滌中和之；強堿腐蝕傷，則先以大量清水沖洗后，再用5%醋酸或5%硼酸溶液洗滌中和之。若受傷部位是眼部，經過上述步驟處理后，zui后滴入橄欖油或液體石
臘1、2 滴，滋潤之。
（4）吸入病菌菌液：應立即吐入盛有消毒液的容器內消毒，并用1：1000高錳酸鉀漱口；根據菌類不同，必要時需服藥預防。
（5）細菌污染衣物：應立即脫下，放入3%來蘇爾或3%氯胺液內浸泡半小時，或仔細包好經高壓蒸汽消毒后清洗。
（6）菌液污染桌面：傾倒適量2-3%來蘇爾或0.5% 84 消毒液于污染處，浸泡半小時后抹去。若手上沾有活菌，應浸泡于上述消毒液10-20 分鐘后，再以肥皂水沖刷之。
7.看示教時，未經允許，不得移動顯微鏡推進尺。
8.愛護實驗室器材及設備，認真填寫實驗設備使用紀錄。不慎發生損壞時，應立即報告老師，照章賠償。
9.實驗結束后，凡使用過的實驗器材必須放在地點，如吸過菌液的吸管，毛細吸管要投入含有2-3%來蘇爾或0.1%新潔爾滅的玻璃筒中，或置“待消毒”處，不得放在桌上，亦不可沖洗于水槽內。用過的波片也應放于含有消毒液的容器內。需要培養的實
驗材料集中后放入溫箱中培養。
10.實驗完畢，應及時清理實驗室（包括桌面，地面，試驗用具等），值日生打掃室內衛生，管好門窗、水電。離開實驗室前，將雙手在消毒液內浸泡3-5分鐘，再用清水洗凈，方可離室。
三. 顯微鏡的使用
（一）普通光學顯微鏡的基本結構
光學顯微鏡的基本結構包括光學和機械兩個部分。光學部分主要有目鏡、物鏡、鏡筒、內置光源（或反光鏡）、光闌等；機械部分包括鏡座、鏡臂、調節螺栓、載物臺、夾持器、
轉換器、粗調焦手輪及細調焦手輪等。（見圖1-1）
圖1 光學顯微鏡的基本結構示意圖
（二）顯微鏡（油鏡的使用）
顯微鏡的物鏡一般有低倍鏡、高倍鏡及油鏡。病原生物學實驗中zui常用者為油鏡。
1.油鏡的原理 使用油鏡時需在玻片上滴加香柏油。由于從標本玻片上透過的光線，因介質密度不同，部分光線發生折射散失，使射入物鏡光線減少（高倍鏡孔徑較大，影響不顯著），因油鏡的孔徑較小，進入的光線則不夠，致使物象顯現不清。當在油鏡與標本片之間加香柏油后，香柏油折射率（n=1.515）和玻璃的折射率（n=1.52）,因此可增加進入透鏡的光線，使視野亮度加強。
2. 在油鏡頭上常有下列幾種標記：①放大倍數是90×或100/；若鏡筒的長度不變，顯微鏡的放大倍數=目鏡倍數乘以物鏡的倍數。②鏡頭下緣有一白色線圈或黑色線圈；③刻有
“油”或外文“HI”、“Oel”、“Oil”等字樣。④油鏡頭的長度大于低倍鏡和高倍鏡。
3. 使用方法
① 對光 轉動轉換器，將低倍鏡鏡頭（4 倍、10 倍）轉至載物臺中央透光孔位置，打開透光光闌，對光，直至目鏡中出現光線zui明亮、zui均勻的視場為止。顯微鏡的光源可分為內置光源和外置照明。內置光源：接通電源，按下底座的開關，電源打開即可。外置光源：將光圈放到zui大位置，在用眼睛觀察目鏡的同時，轉動反光鏡使其朝向光源（自然光或燈光），使視野中的光線zui明、均勻。如靠近光源，可用平面反光鏡，如距光源較遠，可用凹面反光鏡。根據所觀察的標本，升降集光器和縮放光圈，以獲*光度。一般染色標本用油鏡檢查時，光度宜強，可將光圈開足，集光器上升至與載物臺相平；檢查未染色標本用低倍鏡或高
倍鏡觀察時，應適當縮小光圈，下降集光器，使光度減弱。
② 裝片 將標本片放置在工作臺的夾持器中，用夾持起移動標本片至工作臺開口中心（透光孔處）。
③ 調節焦距 通過旋轉粗調焦手輪，將載物臺升到zui高限定位置（制片不能觸到物鏡），此時已準備好調焦。使用4 倍或10 倍物鏡，在目視目鏡的同時，旋轉粗調手輪，使工作臺緩慢下降，在目視目鏡中觀察到的清晰的圖像時，再調節光闌聚光鏡孔，選擇與物鏡相匹配的孔，調節微調焦手輪，使視野中的圖像zui清晰。用低倍鏡找出標本的范圍，然后提高鏡筒，在標本的待檢部位加一小滴香柏油，慢慢將油鏡頭浸于油中，但勿接觸玻片。然后，自目鏡處一面觀察，一面微轉動粗調節器，使鏡筒徐徐上升，待看到模糊物象時，改用細調節器調至物象清晰。如果是滴片標本，先滴一滴標本在玻片上，輕輕蓋上蓋玻片。加蓋玻片時，先將蓋玻片的一邊與在玻片上的水滴邊緣接觸，然后自一側輕輕放下，先在低倍鏡下觀察，然后在高倍鏡下觀察，通過改變光圈的大小或轉動細調焦手輪。
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